Black13

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都说蛋白难做，最近才真真切切地体会到人家的苦衷……难，真的很不容易！

今天说说近况：可恶的包涵体

这鸡蛋可是好东西 ，蛋白也一样，不管是实验室还是化妆间都可以见到蛋白。提到这两个地方，呵呵，东西可都是不菲啊！鸡生蛋，差不多每天一个，我们做蛋白可没法比，杀了我们也没有用。已经连续两个月在鼓捣同一个蛋白了，刚开始看不到表达，然后WesternBlot检测，居然只有pET32a的有表达（Merk还是很强的），在AE里面表达量太小，给忽略了；Rosetta里面量大，但杂得很（都说Rosetta做稀有密码子好，这回见到了，比AE至少表达量高一倍）。然后就遇到了现在的问题……

遇到包涵体，不能说是不幸，偶尔会有非常非常纯的包涵体，那就是一金蛋，省去了纯化的烦心事；而我要对付的这个连鸡蛋都不如。

坚强——8M泡过夜才溶得充分，不降解 ；团结——目的蛋白和杂蛋白就是分不开，Ni-IDA、DEAE ，怎么进去怎么出来；宁死不屈——冻融变性沉淀、酶切变性沉淀……

噩梦啊！什么时候才能到头啊！

下一个蛋白据说99.99%是包涵体，因为就是那样设计的……今天电泳，希望它能纯一点儿……